Caracterización de Ureaplasma/Mycoplasma en muestras respiratorias de recién nacidos

Artículo de Investigación

 

Caracterización de Ureaplasma/Mycoplasma en muestras respiratorias de recién nacidos

Characterization of Ureaplasma/Mycoplasma in respiratory samples from newborns

 

Dianiley García Gómez1* https://orcid.org/0000-0001-9572-5570
Nadia María Rodríguez Preval2 https://orcid.org/0000-0002-1921-2527
Maida López Pérez1 https://orcid.org/0000-0002-3315-5522
Noira Durán Morera1 https://orcid.org/0000-0002-7416-9058
Rafael Abreu Duarte3 https://orcid.org/0000-0003-4784-8546
Victor Manuel de la Paz Montesino3 https://orcid.org/0000-0002-5011-1775

 

1Hospital Provincial Gineco obstétrico Universitario "Mariana Grajales". Villa Clara, Cuba.
2Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. La Habana, Cuba.
3Centro Provincial de Higiene, Epidemiología y Microbiología. Villa Clara, Cuba.

*Autor para la correspondencia. Correo electrónico: diagg@infomed.sld.cu

 

 

RESUMEN

Introducción: La presencia de micoplasmas genitales en el tracto respiratorio de los recién nacidos se asocia con una importante morbilidad y mortalidad perinatal.
Objetivo: Relacionar variables clínico-epidemiológicas con Ureaplasma/Mycoplasma, determinar frecuencia de aislados y de coinfección en muestras respiratorias positivas de recién nacidos.
Métodos: Estudio descriptivo, transversal de una serie de casos de 98 recién nacidos hospitalizados. Se analizaron por microbiología 94 hisopados faríngeos y 4 secreciones bronquiales por la Multiplex-PCR para la identificación de especies de Ureaplasma/Mycoplasma. Se obtuvo otras variables clínicas como: Antecedentes de parto pretérmino, bajo peso, rotura prematura de membranas de 18 horas o más, bronconeumonía connatal con o sin tratamiento antimicrobiano. Como medida de resumen se utilizaron las frecuencias absolutas, relativas y prueba de independencia basada en la distribución ji cuadrado.
Resultados: De los 4 recién nacidos con bronconeumonía connatal, el 50 % resultó positivo a Mycoplasma genitalium y Mycoplasma hominis indistintamente. Asimismo, el 19,54 % de los neonatos bajo peso y el 13,79 % de los pretérmino tuvieron presencia de estas bacterias. No hubo significación estadística entre las variables clínicas y estos resultados. Se identificaron 7 aislados de Ureaplasma urealitycum y de Mycoplasma hominis, 4 de Ureaplasma parvum y 3 de Mycoplasma genitalium. En 8 muestras clínicas se obtuvo coinfección con otras bacterias.
Conclusiones: No hubo relación entre variables clínico-epidemiológicas y los micoplasmas genitales. Se identificaron especies de Ureaplasma y Mycoplasma en muestras respiratorias de recién nacidos hospitalizados, así como coinfección entre varios microorganismos.

Palabras clave: coinfección; recién nacidos; tracto respiratorio.

ABSTRACT

Introduction: The presence of genital mycoplasmas in the respiratory tract of the newborns has been associated with significant perinatal morbidities and mortality.
Objective: Relating clinical-epidemiological variables to Ureaplasma/Mycoplasma, determine frequency of isolated and the coinfection in positive respiratory samples from newborns.
Methods: Descriptive, cross-sectional study of a series of cases in 98 hospitalized newborns. 94 pharyngeal swabs and 4 bronchial secretions were microbiologically analyzed by Multiplex-PCR for the identification of Ureaplasma/Mycoplasma species and other clinical variables were obtained such as history of preterm birth, low weight, premature rupture of membranes of 18 hours or more, with connatal bronchopneumonia or without antimicrobial treatment. As a summary measure, absolute and relative frequencies and a test of independence based on the ji square distribution were used.
Results: Of the 4 newborns with connatal bronchopneumonia, 50 % were positive for Mycoplasma genitalium and Mycoplasma hominis interchangeably. Likewise, 19.54 % of the newborn underweight and the 13.79 % of the preterm they had these bacteria's presence. There was no statistical significance between the clinical variables and these results. 7 isolates of Ureaplasma urealitycum and Mycoplasma hominis, 4 of Ureaplasma parvum and 3 of Mycoplasma genitalium were identified. Coinfection with other bacteria was obtained in 8 clinical samples.
Conclusions: There was no relationship between clinical-epidemiological variables and genital mycoplasma. Ureaplasma and Mycoplasma species were identified in respiratory samples from hospitalized newborns, as well as coinfection between several microorganisms.

Keywords: co-infection, newborns; respiratory tract.

 

 

Recibido: 19/02/2024
Aprobado: 29/05/2024

 

 

INTRODUCCIÓN

La colonización por micoplasmas genitales como Ureaplasma spp. y Mycoplasma hominis (M. hominis) en mujeres embarazadas, se ha asociado con morbilidades neonatales como: Prematuridad, bronconeumonía connatal, displasia broncopulmonar y hemorragia intraventricular. Sin embargo, el papel de Ureaplasma spp. como patógeno, no está claro porque a menudo se encuentra como un organismo comensal en recién nacidos (RN) asintomáticos.(1,2,3)

Durante el embarazo, la transmisión vertical ocurre a partir de una infección que puede ascender desde el tracto genital inferior. Los microorganismos pueden ingresar al líquido amniótico, multiplicarse y luego colonizar directamente la mucosa respiratoria del feto. También pueden transmitirse por vía hematógena y a través de la placenta, al ingresar a la circulación fetal por los vasos umbilicales. La intraparto también se ha descrito, por la exposición a un canal del parto infectado, con la subsiguiente colonización neonatal.(4)

Los cultivos microbiológicos de la faringe y el aspirado traqueal de recién nacidos, de madres colonizadas inmediatamente después del nacimiento, muestran altas tasas de transmisión, que van desde el 38 % en neonatos a término hasta el 95 % en los de muy bajo peso al nacer.(5)

A menudo, las muestras de cultivos traqueales obtenidas de recién nacidos, durante los primeros días del nacimiento, son negativas. Con un tiempo promedio de positividad de 8 días, probablemente debido a un inóculo inicial bajo.(6)

Ureaplasma spp. y M. hominis pertenecen a la clase Mollicutes, que se caracteriza por una notable reducción de sus genomas.(7,8)

Desde el año 2000, Ureaplasma parvum (U. parvum) se ha distinguido como ser una especie autónoma. Se encuentra con más frecuencia que Ureaplasma urealyticum (U. urealyticum) y se cree que es más amenazante durante el embarazo.(9)

U. urealyticum y M. hominis pueden desempeñar un papel importante en el trabajo de parto prematuro,(10) con una incidencia en Europa del 14,3 % de las mujeres que fueron positivas para M. hominis.(11)

Un único estudio publicado en Cuba por Rodríguez N y otros(12) en el 2016, analizan 62 muestras respiratorias por la reacción en cadena a la polimerasa (PCR), para la clase Mollicutes y obtienen 6 positivas a micoplasma genitales.

En Villa Clara durante el 2019 (13) se aisló Ureaplasma spp. en un 44,19 % de las muestras endocervicales de 86 embarazadas sintomáticas, hospitalizadas a partir del segundo trimestre de gestación.

Se está prestando mayor atención a Ureaplasma spp. y M. hominis en microbiología clínica, debido a la mejora de los métodos para su diagnóstico, gracias a las potentes técnicas de base molecular que se pueden utilizar para la identificación primaria de muestras clínicas. Aunque existe relación entre Ureaplasma spp., M. hominis y resultados adversos para el embarazo y el recién nacido; no se ha recomendado la detección rutinaria de estos microorganismos y es que, según la historia, ha resultado compleja la identificación de manera confiable, porque son difíciles de cultivar.

El estándar de oro para diagnosticar las especies de Ureaplasma es la PCR, que se puede usar para detectar infecciones en el útero a través de muestras de orina,(8) frotis endocervicales/uretrales,(14) líquido amniótico(15) y placenta.(16)

Los objetivos de este estudio son relacionar variables clínico-epidemiológicas con Ureaplasma/Mycoplasma, determinar frecuencia de aislados y de coinfección en muestras respiratorias positivas de recién nacidos.

 

 

MÉTODOS

Diseño

Estudio descriptivo, transversal de una serie de casos.

Sujetos

La serie estuvo conformada por 98 RN hospitalizados en la unidad de neonatología del Hospital Provincial Gineco-Obstétrico Universitario "Mariana Grajales" de Santa Clara, Villa Clara, en el período comprendido de marzo del 2022 hasta noviembre del 2023.

Las muestras respiratorias consistieron en 94 hisopados faríngeos y 4 de secreciones bronquiales provenientes de tubo endotraqueal.

La garantía en la calidad del diagnóstico microbiológico y posible inclusión del RN en el estudio fue avalada por: 2 especialistas de segundo grado en microbiología, un doctor en ciencias de la salud y un especialista de segundo grado en neonatología. Evaluaron la calidad de las muestras tomadas y recibidas, el estado general de cada neonato y descartaron la presencia de otras enfermedades infecciosas del aparato respiratorio.

Variables

La variable clínica seleccionada fue: Presencia de bronconeumonía connatal con o sin tratamiento antimicrobiano y como factor de riesgo: Prematuridad, rotura prematura de membranas (RPM) mayor de 18 horas y bajo peso al nacer.

Otras variables utilizadas para el estudio fueron: Resultados de la reacción en cadena a la polimerasa, microbiológicos y presencia o no de coinfección.

Se consideró como prematuro, el neonato nacido antes de las 37 semanas de edad gestación; y como bajo peso al nacer, al de menor de 2500 gramos.

Procedimientos

En la toma de las muestras, se cumplieron las normas establecidas por el Laboratorio de Microbiología del Hospital Provincial Gineco-Obstétrico Universitario "Mariana Grajales". Para minimizar el sesgo, en la toma y envío de las muestras, siempre lo realizaron médicos especialistas y un residente de segundo año en microbiología, encabezados por la primera autora. Siempre se conservaron las muestras a menos 70 °C y en 2 mililitros de medio de transporte suministrado por el sistema MYCO WELL D-ONE.

Se enviaron al laboratorio nacional de referencia de micoplasmas del Instituto de Medicina Tropical (LNR-M del IPK), donde se realizó la extracción del ácido desoxirribonucleico (ADN), mediante el estuche comercial QIAamp DNA Mini (QIAGEN, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante.

Para la identificación de Ureaplasma/Mycoplasma se realizó la PCR-Múltiple en tiempo real que permitió la identificación de U. parvum, U. urealyticum, M. hominis y Mycoplasma genitalium ( M. genitalium).

La lectura se realizó en el canal de fluorescencia correspondiente al marcaje de cada sonda utilizada: Canal verde para U. urealyticum, canal amarillo para U. parvum, canal rojo para M. genitaliumy canal naranja para M. hominis. Se consideró como muestra positiva, aquella que mostró una amplificación exponencial a partir de un ciclo umbral (ct, siglas en inglés de Cycle Treshold) de 23.

Se utilizaron como controles las cepas de referencia de micoplasmas de origen humano de la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC, siglas en inglés), pertenecientes a la colección de cepas del LNR-M del IPK: M. hominis PG 21T (ATCC 23114), U. parvum (ATCC 27815), U. urealyticum (ATCC 27618) y M. genitaliumG37T (DK).

Se establecieron otros criterios de coinfección como el de Ureaplasma spp. y Mycoplasma spp. combinado con otras bacterias.

Procesamiento estadístico

Los datos fueron obtenidos de las historias clínicas y el registro de laboratorio, llevados a ficheros y procesados a través de los programas SPSS versión 22 y Microsoft Excel 2016.

Se caracterizó la serie de casos según la frecuencia absoluta y relativa de las diferentes variables.

Para probar la independencia entre variables se realizó la prueba de independencia basada en la distribución ji cuadrado; ante limitaciones de la prueba se tomó el resultado de la prueba exacta de Fisher. Se trabajó con un índice de confianza de un 95 % (a= 0,05).

Aspectos bioéticos

Todos los representantes legales de los recién nacidos dieron su consentimiento por escrito después de haberles explicado completamente el procedimiento.

El estudio se realizó tras previa evaluación y aprobación por el Comité Científico (ACUERDO 57/22), el Comité de Ética (acuerdo 2/22) y a las autoridades sanitarias de la institución. Se mantuvo la confidencialidad de las cepas y su procedencia; se garantizó su uso únicamente con fines científicos. Se tuvieron presentes las normas éticas establecidas en el contexto y los principios bioéticos de autonomía, beneficencia, no maleficencia y justicia.

 

 

RESULTADOS

En el periodo de estudio, solamente a 4 RN se les diagnosticó bronconeumonía connatal y resultaron 2 muestras positivas (50 %) a M. genitalium y M. hominis indistintamente. El 23,81 % y el 19,54 % de los RN con antecedentes de parto transpelviano y bajo peso resultaron positivos a la PCR. De los 11 con antecedentes de RPM mayor de 18 horas, el 90,91 % resultó negativo. No hubo significación estadística entre las variables clínico-epidemiológicas y los resultados de la PCR para Ureaplasma/Mycoplasma (tabla 1).

 

 

De las 98 muestras clínicas, se diagnosticaron 17 positivas (17,35 %) y 81 negativas (82,65 %). En la figura 1 se muestra la frecuencia de los aislados en las muestras positivas: 7 (41,18 %) correspondieron a U. urealitycum y M. hominis, 4 (23,53 %) a U. parvum y 3 (17,65 %) a M. genitalium.

 

 

En cuanto al diagnóstico microbiológico positivo con coinfección, como se muestra en la tabla 2, se diagnosticaron en 8 muestras clínicas más de un microorganismo. Predominó la asociación de U. parvum y U. urealyticum (n= 2; 25 %).

 

 

 

DISCUSIÓN

Ureaplasma spp. y Mycoplasma spp. son patógenos que afectan los sistemas respiratorio y urogenital humanos y son responsables de un amplio espectro de trastornos inflamatorios.(17) Cuando en los RN se desarrolla un síndrome de dificultad respiratoria, con un grado mayor o menor de hipertensión pulmonar, se debe sospechar la presencia de infecciones por U. urealyticum y M. hominis en los aspirados traqueales, sobre todo en los hijos de madres con corioamnionitis.(18) Según datos internacionales, en Perú durante el 2020, el 45 % de los recién nacidos presentaron neumonía, en sus primeros 6 días de vida.(19)

En la presente investigación 4 neonatos presentaron bronconeumonía connatal, de ellos 2 fueron positivos a la PCR (50 %) y los aislamientos correspondieron a M. genitalium y M. hominis; dato que no se coincide con algunos autores,(13,20) que obtuvieron Ureaplasma spp. como principal germen aislado en diversas muestras neonatales.

M. genitalium está generando una preocupación cada vez mayor como causa de infecciones de transmisión sexual, al producir hasta el 20 % de los casos de: uretritis no gonocócica, cervicitis, enfermedad inflamatoria pélvica postgestacional, embarazo ectópico y parto pretérmino.(21,22)

Aunque no existió relación significativa entre las variables epidemiológicas de bajo peso al nacer, prematuridad y antecedentes de RPM mayor de 18 horas y los resultados positivos a la PCR para Ureaplasma/Mycoplasma; se obtuvieron porcentajes de 19,54 %, 13,79 % y 9,09 % respectivamente; resultados inferiores (pero clínicamente relevantes) al grupo de neonatos con muestras negativas, pero que coinciden con otros autores como Sun T y otros.(20)

Otras investigaciones(20,23) relacionaron los resultados desfavorables del embarazo como parto prematuro, bajo peso al nacer y síndrome de respuesta inflamatoria fetal con los micoplasmas genitales. Silwedel C y otros(24) concluyen que la relevancia de la colonización por Ureaplasma spp. en infantes prematuros aún puede estar subestimada.

El mecanismo de asociación entre la colonización en vagina de Ureaplasma spp. y Mycoplasmaspp. hace que el trabajo de parto prematuro sea complejo y multifactorial. El sitio, los factores de virulencia y la magnitud de la respuesta inmune a los microorganismos infectantes, son clave para determinar el resultado del embarazo.(25)

En el estudio de las 98 muestras clínicas se obtuvo un mayor porcentaje de resultados negativos sobre los positivos (82,65 % y 17,35 %), por el método de la PCR en tiempo real. Se identificaron 7 aislados de U. urealitycum y M. hominis, 4 de U. parvum y 3 de M. genitalium. No coinciden estos datos con los encontrados por Rodríguez N y otros(12) que detectaron de 25 muestras respiratorias positivas, 3 U. parvum, 2 U. urealyticum y 1 M. hominis, aunque sí presentaron un mayor número de aislamiento de Ureaplasma spp.

Otra investigación por Gallini F y otros,(26) en 254 neonatos prematuros, informó que solo 32 (12,6 %) estuvieron expuestos en la etapa prenatal a la colonización por Ureaplasma/Mycoplasma; de ellos 26 aislamientos correspondieron a Ureaplasma spp. (10 U. urealyticum , 4 U. parvum y 12 Ureaplasma spp) y 6 a Mycoplasma spp. Ninguno de los neonatos prematuros tuvo un cultivo respiratorio positivo a estas bacterias en el periodo posnatal. Resultado que también coincide con que el género Ureaplasma son los más patógenos, tanto para la embarazada como su producto de la concepción.

Es importante resaltar el papel esencial que cumple el diagnóstico de Ureaplasma y Mycoplasma como etiología infecciosa cervicovaginal en embarazadas. Su elevada incidencia puede ser el resultado del desequilibrio que ocurre en el microambiente vaginal, que conlleva al ascenso de estos microorganismos hacia el endocérvix; sitio donde colonizan e invaden. Esto aumenta el riesgo de daño a las membranas ovulares y provocar efectos perinatales adversos.(27)

En las investigaciones de Rodríguez N y otros(12) y García E y otros(13) detectaron coinfección de U. parvum con Morganella morganii y Ureaplasma spp. con Candida spp. en una de las muestras respiratorias de RN con complicaciones y en 6 (6,98 %) especímenes endocervicales de gestantes hospitalizadas respectivamente.

Y es que Ureaplasma/Mycoplasma producen amoníaco como resultado de la descomposición de la urea y la arginina. El amoníaco eleva el pH, lo que puede causar una infección mixta con otros microorganismos.

Una limitación del estudio es que se necesitan más estudios multicéntricos y una población más grande de RN, para comprender mejor si la colonización materna con Ureaplasma/Mycoplasma puede afectar o no a los neonatales.

No hubo relación entre variables clínico-epidemiológicas y los micoplasmas genitales. Se identificaron especies deUreaplasma y Mycoplasma en muestras respiratorias de recién nacidos hospitalizados, así como coinfección entre varios microorganismos.

 

 

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Conflictos de interés

Los autores declaran no tener ningún conflicto de interés. No recibieron financiación para la realización de este trabajo.

 

Información financiera

No recibieron financiación para la realización de este trabajo.

 

Contribuciones de los autores

Conceptualización: Dianiley García Gómez, Noira Durán Morera
Análisis formal: Dianiley García Gómez, Noira Durán Morera
Investigación: Dianiley García Gómez, Víctor Manuel de la Paz Montesino
Metodología: Dianiley García Gómez, Nadia María Rodríguez Preval, Rafael Abreu Duarte, Noira Durán Morera
Supervisión: Dianiley García Gómez, Maida López Pérez
Visualización: Dianiley García Gómez
Redacción- borrador original: Dianiley García Gómez, Víctor Manuel de la Paz Montesino
Redacción- revisión y edición de la versión final: Dianiley García Gómez, Nadia María Rodríguez Preval, Maida López Pérez, Noira Durán Morera, Rafael Abreu Duarte, Víctor Manuel de la Paz Montesino

 

Disponibilidad de los datos

Archivo complementario: Base de datos de investigación. Excel 2016.

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